产品概述本品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源多克隆抗体货号A302-173A特异性靶向人源Cul5蛋白Cullin-5又称VACM-1。该抗体经抗原亲和纯化以完整IgG形式提供适用于免疫组织化学IHC、免疫沉淀IP和蛋白质印迹WB实验可识别小鼠及人类样本中的Cul5蛋白。免疫原设计靶向Cul5蛋白N端第1-50位氨基酸区域能够高效识别天然构象及变性状态下的目标蛋白。靶点背景Cul5与E3泛素连接酶复合物Cullin-5Cul5是Cullin家族成员之一作为多种E3泛素连接酶复合物的核心骨架蛋白在泛素-蛋白酶体系统中发挥关键作用。结构与功能特征作为支架蛋白同时招募底物识别模块如SOCS盒蛋白和E2泛素结合酶参与形成Cullin-RING E3连接酶CRL复合物介导底物蛋白的泛素化修饰通过泛素化途径调控多种信号分子和转录因子的稳定性别名与历史Cul5也被称为VACM-1加压素激活的钙动员受体1最初作为加压素受体信号通路的调节因子被发现。后续研究证实其核心功能为E3连接酶骨架蛋白。组织与功能意义Cul5在多种组织中广泛表达参与细胞周期调控、信号转导、病毒感染限制如HIV-1 Vif蛋白劫持Cul5介导APOBEC3降解以及神经内分泌调节等生物学过程。抗体特性规格参数 规格靶点 Cul5 (Cullin-5)宿主 兔克隆性 多克隆形式 完整IgG同种型 IgG偶联物 非偶联纯度 抗原亲和纯化浓度 200 µg/ml抗原物种 人反应性 小鼠、人储存与稳定性储存温度2-8°C请勿冷冻有效期自收货之日起1年缓冲液Tris缓冲盐水含0.1% BSA及0.09%叠氮钠 注意叠氮钠作为防腐剂如需进行细胞培养实验或体内注射应通过透析或超滤去除。BSA作为稳定剂不影响多数免疫检测。应用方法与实验条件蛋白质印迹WB推荐稀释度1:2000 - 1:10,000通用流程要点封闭液及抗体稀释液5% Milk-TBST一抗孵育过夜4°C摇床洗涤TBST缓冲液每次5-10分钟共3次二抗选择细胞裂解液WB使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体A120-101P稀释度参照产品说明书免疫沉淀物WB使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体封闭液中添加5%正常猪血清货号S100-020以消除IgG重链约55 kDa的交叉干扰预期条带Cul5分子量约为92 kDa实际迁移可能因修饰略有差异。免疫沉淀IP使用剂量6 µg抗体/mg细胞裂解液操作建议裂解液建议使用非变性裂解缓冲液如NP-40或Triton X-100缓冲液以维持蛋白复合物的天然状态抗体与裂解液共孵育2小时至过夜4°C旋转加入Protein A/G琼脂糖珠继续孵育2-4小时洗涤后用SDS上样缓冲液洗脱免疫复合物进行WB检测免疫组织化学IHC推荐稀释度1:500 - 1:2000抗原修复对于福尔马林固定、石蜡包埋FFPE组织切片推荐使用柠檬酸缓冲液pH 6.0进行热诱导抗原修复微波或高压锅处理15-20分钟。适用样本经验证可检测人及小鼠组织中的Cul5表达。生产与质控纯化工艺使用固相载体固定的Cul5特异性N端表位第1-50位氨基酸进行亲和纯化。该策略确保抗体特异性识别Cul5最大限度降低与其他Cullin家族成员的交叉反应。浓度测定基于比尔定律以1 mg/ml IgG在A280波长下吸光度为1.4作为计算基准。应用注意事项1. N端表位的优势本抗体靶向Cul5蛋白N端该区域在不同Cullin家族成员中差异较大特异性更强。同时N端区域通常参与骨架装配但抗原亲和纯化保证抗体仍能识别天然构象的Cul5。2. 多物种反应性已验证对人和小鼠Cul5有交叉反应。用于其他物种如大鼠、猴时建议先进行预实验验证。3. WB稀释度范围1:2000-1:10,000对于表达量较高的细胞系如HEK293、HeLa建议从中高稀释度1:5000开始以降低背景。若信号较弱可适当增加一抗浓度或延长曝光时间。4. IP使用剂量6 µg/mg裂解液是经验证的起始用量。若目标蛋白表达丰度较低可适当增加至10 µg/mg。建议同时设置正常兔IgG作为阴性对照以及已知相互作用蛋白的抗体作为阳性对照。5. IHC抗原修复使用FFPE切片时务必进行柠檬酸缓冲液pH 6.0热修复。若信号强度不足可尝试EDTA缓冲液pH 8.0-9.0但优先推荐柠檬酸以避免过度修复导致的背景升高。6. 储存与取用2-8°C恒温保存避免反复开启和温度波动。本品以200 µg/ml浓度提供无需分装按需吸取即可。请勿冷冻冷冻会导致抗体聚集和活性下降。7. 叠氮钠对HRP的影响叠氮钠会不可逆抑制辣根过氧化物酶活性。如使用HRP偶联二抗及化学发光检测WB实验中可通过充分洗涤至少3次每次5分钟以上去除叠氮钠干扰。IHC实验中抗原修复步骤本身可稀释去除叠氮钠但建议在抗体稀释液中避免额外添加叠氮钠。相关产品推荐山羊抗兔IgG重链和轻链抗体A120-101P——用于细胞裂解液WB检测抗兔IgG轻链HRP偶联抗体——用于免疫沉淀物WB检测有效避免约55 kDa重链信号的干扰正常猪血清S100-020——用于IP-WB封闭液添加5%降低非特异性背景蛋白A/G琼脂糖珠——用于免疫沉淀实验中的抗体捕获研究应用场景本抗体适用于以下研究方向E3泛素连接酶复合物组装研究通过免疫沉淀结合质谱鉴定Cul5相互作用蛋白如SOCS家族成员、Elongin B/C等病毒感染机制研究HIV-1 Vif蛋白如何劫持Cul5介导APOBEC3G的泛素化降解肿瘤生物学Cul5在多种肿瘤中表达异常参与细胞周期调控和信号转导神经内分泌调节Cul5/VACM-1在加压素信号通路中的功能研究组织定位分析通过IHC检测Cul5在不同组织及病理切片中的表达分布小鼠和人蛋白稳定性调控检测Cul5对特定底物泛素化水平的影响