一、产品概述小鼠IgG亚型分为IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c及IgG3等其中IgG2b在结构上具有独特之处——其分子呈“T”形而非经典的“Y”形这是由链内二硫键相互作用所致。本文介绍一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对小鼠IgG2b重链的特异性山羊多克隆抗体货号A90-109P。该抗体经固相吸附和亲和纯化以未标记完整IgG形式提供适用于ELISA、免疫细胞化学ICC、免疫组织化学IHC和蛋白质印迹WB等应用。二、核心规格参数参数 详细信息靶标 小鼠IgG2b重链反应性 小鼠应用 ELISA ICC IHC WB宿主 山羊克隆性 多克隆形式 完整IgG亚型 IgG标记 未偶联纯度 抗原亲和纯化抗原物种 小鼠浓度 1 mg/ml储存温度 2 – 8 °C有效期 自收货之日起2年缓冲液 含0.09%叠氮化钠的磷酸盐缓冲盐水三、生产与纯化工艺本抗体的生产采用固相吸附技术以确保亚类特异性。具体而言抗血清经固相吸附处理以去除与其他IgG亚类交叉反应的组分。随后通过亲和层析进行分离——将小鼠IgG2b抗原偶联至琼脂糖凝胶抗体经过该亲和柱后获得高纯度产物。免疫球蛋白浓度的测定依据比尔定律1 mg/ml IgG在280 nm波长处的吸光度为1.4。四、特异性与交叉反应性经免疫电泳和ELISA验证本抗体与小鼠IgG2b发生特异性反应。与小鼠IgA、IgM、IgG1、IgG2a、IgG2c、IgG3及IgE的交叉反应性均低于1%显示出极高的亚类特异性。重要提示部分杂交瘤克隆可能表达异常的免疫球蛋白相关肽段这些异常产物可能被本抗体错误识别。使用者若检测杂交瘤上清或腹水样本建议同时设置适当的阴性对照如使用不相关的同型对照抗体或不表达IgG2b的亲本细胞系上清以排除假阳性。五、推荐应用与稀释度以下稀释度范围供参考。请注意并非所有列出的应用均经过实验室的专门验证使用者需根据具体实验条件进行优化。酶联免疫吸附测定ELISA常规检测1:1,000 – 1:30,000包被酶标板1:100 – 1:500在ELISA中本抗体可作为捕获抗体包被或检测抗体标记二抗后使用。由于产品为未偶联形式用于检测时需配合合适的酶标或荧光标记的二抗如兔抗山羊IgG-HRP。免疫细胞化学ICC推荐稀释度1:200 – 1:2,000适用于培养细胞的固定和通透处理后的染色。建议使用含0.1% Triton X-100和适量正常血清的缓冲液进行封闭以降低背景。免疫组织化学IHC推荐稀释度1:200 – 1:2,000适用于冷冻切片或石蜡切片。对于福尔马林固定、石蜡包埋组织建议根据组织类型优化抗原修复条件如枸橼酸盐缓冲液pH 6.0或Tris-EDTA pH 9.0。蛋白质印迹WB推荐稀释度1:1,000 – 1:30,000适用于还原或非还原条件下的SDS-PAGE。由于本抗体识别的是重链在还原条件下可检测到约55 kDa的条带小鼠IgG2b重链在非还原条件下检测到的信号对应于完整IgG2b约150 kDa。建议设置阳性对照——纯化的小鼠IgG2b蛋白或已知表达IgG2b的杂交瘤细胞裂解液。六、储存与稳定性抗体应在2°C至8°C条件下储存切勿冷冻。反复冻融会导致抗体变性聚集降低效价。自收货之日起在推荐的储存条件下有效期为2年。缓冲液中含有0.09%的叠氮化钠作为防腐剂。注意事项叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性。若计划将本抗体用于HRP标记二抗的检测体系如WB或ELISA中作为一抗使用后再加HRP标记的二抗一般无需去除叠氮化钠因为本抗体本身不含HRP且实验中会经过多次洗涤。但若计划将本抗体直接进行HRP标记则需通过透析或脱盐去除叠氮化钠。叠氮化钠对细胞具有毒性不适用于活细胞染色。